成果简介
三黄连翘合剂是动物科技学院研制开发的一种新型中草药复方制剂，由黄芩、连翘等中草药按一定配比经水提醇沉所得。三黄连翘合剂具有有消炎、保肝胆、促生长、抗病原微生物、抗氧化、提高机体免疫力等功效，且安全可靠、低毒、副作用小、不易产生耐药性。如三黄连翘合剂可减轻因海豚链球菌感染而造成的免疫抑制,保护机体免疫系统,提升免疫力,对罗非鱼感染海豚链球菌有良好的预防效果。对提高南美白对虾肝胰腺相关免疫因子的表达和抑制副溶血弧菌生长以抵抗副溶血弧菌感染具有显著效果。此外，一系列体外抑菌试验表明，三黄连翘合剂对多种病原菌皆具有较好的抑制效果，在水产养殖病害防治上具有极大的开发价值。
在前期研究的基础上，通过剂量筛选、靶动物安全性评价、实验性临床和扩大临床试验探索了三黄连翘合剂对南美白对虾感染副溶血弧菌的预防效果。结果表明，三黄连翘合剂对南美白对虾的作用以20mL/kg剂量效果最佳，在副溶血弧菌感染下的保护率可达75%；推荐剂量（20 mL/kg）的1、3、5倍剂量对南美白对虾均具有良好的安全性；能够有效提高南美白对虾的生长性能，增强其免疫和抗氧化能力，提高免疫应答水平，改善和调节肠道菌群，减弱南美白对虾因副溶血弧菌感染引起的血淋巴细胞过早凋亡，从而减小副溶血弧菌对南美白对虾的急性胁迫，提高对虾生存率。
应用前景
本成果具有广泛的应用前景。三黄连翘合剂由黄芩、连翘等中草药按一定配比经水提醇沉所得，具有易获取、低成本、安全性高、低毒、副作用小、不易产生耐药性等诸多优点。通过大量实验已证实三黄连翘合剂在预防罗非鱼感染海豚链球菌和抑制副溶血弧菌生长上具有良好的效果，并证实了三黄连翘合剂在预防南美白对虾感染副溶血弧菌的显著效果。未来有望将其应用于南美白对虾急性肝胰腺坏死综合征、红体病和传染性皮下及造血组织坏死病毒病等以副溶血弧菌为主要病原或诱因引起的一系列疾病，为其提供预防和治疗药物，在水产养殖病害防治上具有极大的开发价值。
成熟度
本成果目前已通过剂量筛选、靶动物安全性评价、实验性临床和扩大临床试验进一步验证了其在预防南美白对虾感染副溶血弧菌上的显著效果。
“三黄连翘合剂”药理活性：通过给予南美白对虾含不同三黄连翘合剂剂量的三黄连翘合剂35d，测定其在给药结束后的生长性能和免疫功能，并进行副溶血弧菌感染，计算剂量保护率。结果显示三黄连翘合剂能够显著提高南美白对虾的生长性能，增强南美白对虾血清中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、酚氧化酶、超氧化物歧化酶活力和总抗氧化能力，提高其免疫能力，从而减小副溶血弧菌对南美白对虾的急性胁迫，最佳临床推荐用法用量为20mL/kg。
“三黄连翘合剂”安全性：通过给予南美白对虾含推荐剂量（20mL/kg）的1、3、5、10倍剂量的三黄连翘合剂饲料35d，并在18d和35d分别测定南美白对虾生长性能、血生化和血淋巴细胞组成与比例，检查其肝胰腺的组织形态学变化。结果表明，给予南美白对虾连续饲喂35d的三黄连翘合剂能在一定程度上提高南美白对虾生长性能和机体免疫功能，推荐剂量（20 mL/kg）的1、3、5倍均具有良好的安全性。
“三黄连翘合剂”有效性：通过给予南美白对虾含三黄连翘合剂10ml/kg、20ml/kg、40ml/kg的饲料、含三黄散10g/kg的饲料和不添加任何药物的基础饲料，连续饲喂南美白对虾（1.40±0.16g）35d，测定南美白对虾生长性能、消化酶、免疫、抗氧化、免疫应答和肠道菌群，并给予副溶血弧菌急性感染48h，计算各组存活率。结果显示，三黄连翘合剂能显著提高南美白对虾生长性能，免疫功能，抗氧化水平以及免疫应答（ACP，PO，CAT，SOD,IMD和TOLL）水平，其中以S20最为显著；改善肠道微生物区系的稳定性，提高了肠道微生物群的多样性，降低了photobacterium, Fusibacter, Winogradskyella的丰度，提高了Vibrio和Pseudoalteromonas的丰度以及在消化和免疫相关功能的表达，增加了对弧菌的耐受性；此外，在饲料中添加三黄连翘合剂显著提高了南美白对虾对副溶血弧菌急性感染的抵抗力，S20存活率达到75%。
“三黄连翘合剂”临床应用效果：通过给予南美白对虾含三黄连翘合剂20ml/kg的饲料、含三黄散10g/kg的饲料和不添加任何药物的基础饲料，连续饲喂南美白对虾（1.40±0.16g）35d，测定南美白对虾生长性能、消化酶活性、免疫功能和抗氧化能力，并给予副溶血弧菌急性浸泡感染48h后，测定其免疫应答水平和血淋巴细胞凋亡情况，计算各实验组存活率。结果显示，三黄连翘合剂和三黄散均能显著提高南美白对虾生长性能、免疫功能、消化酶活性和抗氧化能力，并提高南美白对虾在感染副溶血弧菌后的免疫应答能力，减弱副溶血弧菌感染引起的血淋巴细胞的前期凋亡，提高南美白对虾抗副溶血弧菌能力。
成果展示
图1 正常南美白对虾 图2 副溶血弧菌感染后的南美白对虾 图3 药物添加的南美白对虾
正常南美白对虾活动灵敏、采食迅捷，体色均匀，虾壳坚硬，肠道、肝胰腺饱满（如图A）；在南美白对虾感染副溶血弧菌后，对虾活动减弱，大部分活虾采食减弱，游泳缓慢，出现假死；体色黄染，虾壳变软，红肠，肠道和肝胰腺萎缩无内容物，且肝胰腺呈弥散状态，出现黄色游泳腿（如图B）；在添加三黄连翘合剂饲喂后的南美白对虾活动灵敏，体态、肠道、肝胰腺饱满（如图C）。
知识产权情况
序号 |
专利号 |
成果名称 |
1 |
CN202111318878.6 |
防治对虾副溶血弧菌病中草药复方制剂及其制备方法 |
成果完成人
动物科学技术学院：胡庭俊
成果转化，请联系成果与合作处，联系人：刘老师，联系电话：0771-3904162。